国产午夜激无码av毛片不卡丨天天澡天天揉揉av在线丨丰满人妻被公侵犯中文版丨免费看内射乌克兰女丨人人草人人做人人爱

　　ELISA實驗—試劑盒實驗基本知識點

　　基本類型:

　　酶聯免疫吸附試驗 (以下簡稱ELISA) ：是酶免疫測定技術中應用的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面，使酶標記的抗原-抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，后者用于測定特異抗體。

　　用途:

　　根據ELISA所用的固相載體而區分為三大類型：一是采用聚苯乙烯微量板為載體的ELISA，即我們通常所指的ELISA(微量板ELISA);另一類是用硝酸纖維膜為載體的ELISA,稱為斑點ELISA(Dot-ELISA);再一類是采用疏水性聚脂布作為載體的ELISA，稱為布ELISA(C-ELISA)。在微量板ELISA中，又根據其性質不同分為間接ELISA、雙抗體夾心ELISA、雙夾心ELISA、競爭ELISA、阻斷ELISA及抗體捕捉ELISA。

　　操作程序:

　　1、間接ELISA

　　本法主要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA為例，間接ELISA的操作程序如下：

　　(1) 材料

　　① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液;

　　② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清;待檢鴨血清;

　　③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。

　　(2) 方法步驟

　　① 加抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

　　② 加待檢血清 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干

　　③ 加酶標抗體 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干

　　④ 加底物液 → 37℃ 30分鐘，加終止液

　　⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值，并計算出P/N比值。

　　(3) 結果判定 已知陽性血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.1，而且已知陽性血清的OD值≥0.4;在上述條件成立的情況下，如果待檢血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.1，而且待檢血清的OD值≥0.4，則判為陽性，否則判為陰性。

　　2、雙抗體夾心ELISA

　　本法主要用于檢測大分子抗原。現以檢測雞傳染性法氏囊病病毒(IBDV)的雙夾心抗體ELISA為例介紹本法的操作程序。

　　① 加抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

　　② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

　　③ 加酶標抗體 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

　　④ 加底物液 → 37℃ 15分鐘，加終止液

　　⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。

　　3、雙夾心ELISA

　　此法與雙抗體夾心ELISA的主要區別在于：它是采用酶標抗抗體檢查多種大分子抗原，它不僅不必標記每一種抗體，還可提高試驗的敏感性。

　　此法的基本程序為：

　　① 加抗體(Ab-1)包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

　　② 加待檢抗原(Ag) → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

　　③ 加用非同種動物生產的特異性抗體(Ab-2)→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

　　④ 加入酶標抗Ab-2抗體(AB-3)→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

　　⑤ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液

　　⑥ 用ELISA檢測儀測定OD值。

　　4、競爭ELISA

　　此法主要用于測定小分子抗原及半抗原，其原理類似于放射免疫測定。

　　其基本程序為：

　　① 抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

　　② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原(對照孔僅加酶標抗原)→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

　　③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液

　　④ 用ELISA檢測儀測定OD值。

　　被結合的酶標抗原的量由酶催化底物反應產生有色產物的量來確定，如果待檢溶液中抗原越多，被結合的標記抗原的量就越少，有色產物就減少，這樣根據有色產物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優點在于快速、特異性高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測;其主要不足在于每種抗原都要進行酶標記，而且因為抗原的結構不同，還需應用不同的結合方法。此外，試驗中應用酶標抗原的量較多。

　　5、阻斷ELISA

　　本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現已成為豬傳染性胃腸炎(TGE)、豬偽狂犬病(PR)及豬胸膜肺炎(AP)的主要檢測方法。

　　下面以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測法為例介紹其操作程序：

　　① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

　　② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

　　③ 加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

　　④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

　　⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

　　⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液

　　⑦ 用ELISA檢測儀測定OD值。

　　本試驗同時設標準陰、陽性血清對照、兔抗AP2型陽性對照、空白對照。

　　Elisa試劑盒 本生一直視質量控制為企業的生命，追求企業競爭力的不斷提升。公司在經營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業精神作為標準，以過硬的質量和優良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創美好的未來。