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人骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)
發(fā)布時(shí)間:2025/5/16瀏覽:225次
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  以下是 人骨成型蛋白4 (BMP4) ELISA試劑盒 的典型實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)模板,具體操作請(qǐng)以實(shí)際試劑盒說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)(不同廠家可能存在差異)。

  人骨成型蛋白4 (BMP4) ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

  BS-0024人 骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒

  檢測(cè)范圍:通常為 X pg/mL X ng/mL(如 15.61000 pg/mL)

  樣本類(lèi)型:血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等

  一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

  1. 試劑盒組成

  | 組分 | 規(guī)格(96T) | 保存條件 |

  | 預(yù)包被抗BMP4微孔板 | 1塊(12條×8孔) | 28℃(干燥) |

  | BMP4標(biāo)準(zhǔn)品 | 12瓶(凍干粉) | 20℃(復(fù)溶后28℃)|

  | 檢測(cè)抗體(生物素標(biāo)記)| 1瓶 | 28℃ |

  | 辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記鏈霉親和素 | 1瓶 | 28℃ |

  | 洗滌緩沖液(10×) | 1瓶 | 28℃(稀釋后4℃)|

  | TMB顯色液 | 1瓶 | 避光28℃ |

  | 終止液(2M H?SO?) | 1瓶 | 室溫 |

  | 封板膜 | 24張 | 室溫 |

  2. 自備材料

  酶標(biāo)儀(450nm波長(zhǎng))

  移液器及槍頭(建議使用低吸附型)

  蒸餾水或去離子水(稀釋洗滌液)

  離心管、EP管

  恒溫孵育箱(37℃)

  二、實(shí)驗(yàn)步驟

  1. 樣本處理

  血清/血漿:采集后離心(3000rpm, 10min),避免溶血。

  細(xì)胞上清:離心去除沉淀,直接檢測(cè)或80℃保存。

  組織勻漿:PBS或RIPA裂解后離心取上清。

  2. 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶與稀釋

  1. 加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(通常為1mL)至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,靜置10min混勻(如1000pg/mL)。

  2. 梯度稀釋至所需濃度(如1000、500、250、125、62.5、31.2、15.6 pg/mL)。

  3. 檢測(cè)流程

  1. 加樣:

  分別加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本(100μL/孔),空白孔加稀釋液。

  覆上封板膜,37℃孵育 90分鐘。

  2. 洗板:

  棄液體,拍干。

  每孔加300μL 1×洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù) 3次。

  3. 加檢測(cè)抗體:

  每孔加入生物素化抗BMP4抗體(100μL),37℃孵育 60分鐘。

  洗板3次(同步驟2)。

  4. 加酶結(jié)合物:

  每孔加入HRP鏈霉親和素(100μL),37℃避光孵育 30分鐘。

  洗板5次(避免殘留酶導(dǎo)致背景升高)。

  5. 顯色:

  每孔加入TMB顯色液(90μL),37℃避光反應(yīng) 1520分鐘(顯藍(lán)色)。

  6. 終止與讀數(shù):

  每孔加入終止液(50μL),顏色變黃。

  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè) 450nm 吸光度(參考波長(zhǎng)630nm)。

  三、數(shù)據(jù)分析

  1. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:

  以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(log scale),OD值為縱坐標(biāo),擬合4參數(shù)邏輯曲線(4PL)。

  2. 計(jì)算樣本濃度:

  根據(jù)曲線方程計(jì)算樣本濃度,超出范圍需稀釋后復(fù)測(cè)。

  四、注意事項(xiàng)

  1. 樣本保存:避免反復(fù)凍融(分裝保存)。

  2. 洗板:洗滌可降低背景,避免孔間交叉污染。

  3. 顯色時(shí)間:若陽(yáng)性孔顯色過(guò)快,可縮短時(shí)間。

  4. 安全:終止液為強(qiáng)酸,避免接觸皮膚。

  五、常見(jiàn)問(wèn)題

  高背景:洗板不充分/抗體殘留。

  低信號(hào):試劑過(guò)期/孵育時(shí)間不足。

  標(biāo)準(zhǔn)曲線不佳:稀釋誤差或標(biāo)準(zhǔn)品降解。

  注:具體參數(shù)(孵育時(shí)間、抗體濃度等)請(qǐng)以試劑盒實(shí)際說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)!如需進(jìn)一步協(xié)助,請(qǐng)?zhí)峁┢放苹蜇浱?hào)。以上說(shuō)明書(shū)僅供參考,具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或供應(yīng)商。

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